10月15日,抗体药物实验室周末学术沙龙由郑华斌博士主讲,主要分享其博士期间的研究内容:探索参与流感病毒生命周期的相关宿主蛋白GNB1影响病毒复制的分子机制。应疫情防控要求,学术沙龙在线上进行。
A型流感病毒(IAV)在20-21世纪间引起了四次疾病大流行,由于其广泛的宿主范围和易变异的特性,IAV将持续威胁公众健康。作为病毒,流感病毒无法依靠自身完成自我复制,在整个生命周期过程中需直接或间接与大量宿主因子相互作用以完成增殖。
在郑华斌博士的研究中,先将H9N2流感病毒在小鼠中适应传代,选取小鼠表型差异的病毒并进行纯化。利用质谱分析对纯化病毒粒子中的宿主蛋白进行鉴定,共鉴定83种差异表达蛋白。选取其中得分较高的10个蛋白进行初筛,发现GNB1能够显著影响流感病毒的复制水平。在A549细胞中过表达GNB1能够增强PR8/H1N1和H9N2病毒的复制水平;相反,敲低GNB1后能够抑制PR8/H1N1和H9N2病毒的复制。为进一步验证这个结果,利用CRISPR/Cas9技术敲除A549细胞中的内源性GNB1后,分别感染PR8/H1N1和H9N2病毒。结果表明,敲除GNB1能够显著抑制PR8/H1N1和H9N2病毒的复制。最后,探索了GNB1影响病毒复制的分子机制。免疫共沉淀实验结果表明,GNB1能促进PB2蛋白与importin α3、importin α5和importin α7的结合,从而促进病毒PB2蛋白的入核,以及聚合酶PB2、PB1和PA复合物的形成,并最终影响病毒RNP的组装。
探索参与流感病毒生命周期的相关宿主蛋白不仅可以促进我们对流感病毒生命周期的全面了解,还可以为抗病毒药物的设计提供潜在靶点,意义重大。与会师生针对参与流感病毒生命周期的相关宿主蛋白GNB1进行了热烈讨论。